Форум
главная страница
‹-  Ветеринарные статьи
 
К диагностике дирофиляриоза собак в Украине

   В последнее время на Украине наблюдается стойкая тенденция возрастания количества собак, инвазированих D.repens. Диагностика гельминтоза утруднена. Наиболее эффективными являются: модифицированный метод Кнота и метод обогащенного мазка. Полученные первые результаты нашей разработки отечественного PCR-анализа инвазии D.repens у собак.

   Дирофиляриоз - в переводе из латинских слов diro и filum, означает «злая нить». Собаки, коты, лисицы и прочие млекопитающие являются естественными хозяевами разных видов дирофилярий, комары - векторные промежуточные хозяева, а люди считаются так называемыми хозяевами «тупика», в котором паразиты редко достигают половой зрелости (4). Для людей это заболевание является результатом случайной зоонозної инвазии, которая распространяется параллельно с инвазией у животных.
   На протяжении последних лет в Украине отмечается стойкая тенденция возрастания количества инвазированных дирофиляриями как собак и котов, так и людей. За период 1998-2001 года нами было диагностировано на базе клиники ветеринарной медицины Печерского и Старокиевского районов г. Киева 73 случаи дирофиляриоза собак. Большинство больных животных поступало с г. Киева и области, но были зарегистрированы одиночные случаи инвазии и в других областях (Черниговская, Сумская). С 1999 г. исследование собак на дирофиляриоз начали планово проводить во всех ветеринарных учреждениях города. По данным Киевского городского управления государственной ветеринарной медицины в 1999 г. зарегистрировано 15, а в 2000 г.- 130 случаев этого заболевания (2). Диагностика гельминтоза в неэндемических регионах всегда затрудненная, так как дирофиляриоз (occult disease - таинственная болезнь) продолжительное время может перебегать бессимптомно, в особенности при низкой плотности микрофилярий в крови и отсутствии, или незначительному количеству половозрелых паразитов (5).
   Материалы и методы исследования. Исследовались собаки разного возраста, пола и породы в г. Киеве, Киевской, Черниговской и Сумской областях Украины, хозяева которых обращались с помощью в клинику ветеринарной медицины Печерского и Старокиевского районов г. Киева. При обследовании собак придерживались следующей схемы:
1) собирали анамнез (особое внимание обращали на местожительство животного и возможность контакта с комарами).
2) проводили клиническое обследование.За течением заболевания мы выделили 4 основные формы дирофиляриоза, или синдромы: интоксикационный, кожный, псевдопухолевых разрастаний, правожелудочковой недостаточности (1), поэтому в особенности тщательно исследовали сердечно-сосудистую систему, кожу и имеющиеся новообразования. Нередко выявляли у собак микрофиляремию и без любых видимых клинических проявлений заболевания.
3) лабораторные исследования включали: микроскопическую идентификацию микрофилярий в капле нативной крови или в сыворотке крови, модифицированный метод Кнота, метод обогащенного мазка, а у отдельных собак - цитологическое исследование пунктатов, полученных с псевдопухолевых и язвенных поражений кожи и мягких тканей.
   Кровь для исследования на дирофиляриоз собирали в количестве 3 мл с добавлением антикоагулянтов (гепаринин или цитрат натрия) вечером или утром, во время высочайшей активности микрофилярий в периферическом сосудистом русле. Прямая микроскопия капли свежей крови под маленьким увеличением микроскопа (х10) наиболее легкий, удобный и быстрый метод диагностики дирофиляриоза. Подвижные личинки паразита заметные во время их активного движения среди эритроцитов. Этот метод дает надежные результаты только при высокой интенсивности инвазии.
   Для исследования сыворотки крови в пробирку берут 3-4 мл венозной крови собаки. Кровь свертывается и микрофилярии мигрируют в сыворотку. Сыворотка со сгустком должна постоять в пробирке несколько часов. После этого пастеровской пипеткой берут несколько капель сыворотки из дна пробирки или из места на границе сыворотки и сгустка крови. Эти капли помещают на предметное стекло, накрывают покровным и исследуют под маленьким увеличением микроскопа на наличие подвижных микродирофилярий. Если кровь до исследования находилась в холодильнике, то предметное стекло с каплями сыворотки выдерживают несколько минут при комнатной температуре для того, чтобы личинки дирофилярий восстановили свою подвижность.
   При определении интенсивности инвазии использовали метод обогащенного мазкая с 5% уксусной кислотой. Кровь в объеме 0,1 мл (2 капли) смешивали с 1,5 мл 5% уксусной кислоты, потом смесь центрифугировали 5 минут при 3000 об/мин, и из осадка готовили мазки, которые окрашивали за Папенгеймом. В случае выявления в периферической крови микрофилярий дополнительно готовили мазки, фиксировали на протяжении 10 минут в парах 10%-ного формалина, проводили цитохимическое определение активности кислой фосфатазы, кислой фосфатазы в присутствии ингибитора тартрату натрия, щелочной фосфатазы (1 ).
   Целью наших исследований являлся анализ эффективности разных методов диагностики дирофиляриоза собак.
   Результаты исследований. Учитывая, что клинические признаки являются неспецифичными при дирофиляриозе собак, решающее значение в установлении диагноза имеют лабораторные исследования с целью выявления микрофилярий. Только в нескольких случаях диагностировали заболевания за наличием половозрелых дирофилярий. Большинство из них находили совсем случайно во время оперативных вмешательств у собак (удаление опухолей, кастрация, герниотомия и др.). Гельминты локализовались в подкожной клетчатке и межмышечных прослойках, активно двигались и свободно перемещались по мягких тканям хозяина. Иногда дирофилярии размещались непосредственно под кожей, образовывая заметную подвижную выпуклость. В 3 случаях паразит прорывал кожный покров и частично выпячивался наружу. Найденные экземпляры паразитов исследовались в Институте зоологии им. И.И.Шмальгаузена НАН Украины. За морфологической структурой все нематоды оказались самками и принадлежали к виду Dirofilaria repens. 7 экземпляров были половозрелыми, их матка заполнена большим количеством яиц и микрофилярий. Среди лабораторных методов диагностики модифицированный метод Кнотта и метод обогащенного мазка наиболее чувствительные, так как они концентрируют микрофилярии, повышая точность диагностики (таблица 1).

Таблица 1. Эффективность выявления микродирофилярий
у инвазированных собак доступными лабораторными методами.

Количество
животных с выявленными микрофиляриями
Анализ биоптата
Метод нативной капли крови
Исследование сыворотки крови
Модифицированый метод Кнота
Метод обогащенного мазка
18
29
32
64
66

   Учитывая то, что у людей дирофиляриоз протекает почти всегда с амикрофиляримией, а у собак микрофиляримия обнаруживается в 75% инвазии D. repens (3), возникает острая необходимость в разработке более чувствительных и специфических тестов для диагностики дирофиляриоза.
   Нами сделаны первые шаги в разработке нового отечественного диагностикума инвазии D. repens, который направлен на определение присутствия остаточного количества ДНК паразита в организме носителя инвазии с помощью ПЦР (полимеразной цепной реакции) (рис. 1).

Рис. 1.
Рис. 1. Результаты анализа на наличие ДНК Dirofilaria repens в образцах крови: 1) дорожки 1-5-образцы крови собак с присутствием микрофилярий; 2) дорожка 6-положительный контроль; 3) 7-8-отрицательный контроль.

Выводы.
1. Отмечено быстрое распространение дирофиляриоза в популяции собак Киевского региона, а также учащаются случаи инвазии D. repens и среди людей.
2. Иногда диагностируют гельминтоз за наличием половозрелых паразитов, но решающее значение имеют лабораторные методы диагностики с целью выявления микрофилярий.
3. Наиболее результативными являются: модифицированный метод Кнота и метод обогащенного мазка.
4. Необъективность полученных данных при амикрофиляримической форме заболевания не разрешает всегда правильно поставить диагноз и исследовать эпизоотологическую картину инвазии собак D.repens в г. Киеве.
5. Полученные первые положительные результаты диагностики дирофиляриоза с помощью метода ПЦР на Украине.

   During the last time the stable tendency to growth of number of dogs, infected D. repens is observed in Ukraine. Diagnostics of hеlміnthе's invasion is complicated.. The most effective are: modified Кnоtt's method and the method of enriched smear.The first results from development of own PCR-based diagnostic system for dog's dirofilariosis are received.

Список использованной литературы.
1. Мазуркевич А.Й., Величко С. В., Василик Н. С., Юревич О. В., Абраменко І. В., Білоус Н. І. Дирофіляріоз собак у Київському регіоні: клінічна картина.// Ветеринарна медицина України.-К.-2001- С.-18-19.
2. Свідерський В. С., Рощіна Р. В. Організація діагностичної роботи та деякі аспекти розповсюдження інфекційних та інвазійних захворювань дрібних тварин в м. Києві.// Зб. матер. VІ Міжн. наук.-практ. конф. 27-28 вересня 2001 р., м. Київ// Проблеми ветеринарного обслуговування дрібних домашніх тварин.- К., 2001- С. 7-9.
3. Cancrini G, Allende E, Favia G, Bornay F, Anton F, Simon F. Canine dirofilariosis in two cities of southeastern Spain. Vet Parasitol 2000 Sep 10;92 (1):81-6
4. Davydov O., Gushva J., Pavlikovskaya T., Kolos L. Human dirofilariosis in the Ukraine.// VII Europen multicolloanium of parasitology. - Parma, 1996. - P.355.
5. Tarello W. (1999) La dirofilariose sous-cutanee a Dirofilaria (Nochtiella) repens chez le chien. Revue bibliographique et cas clinique. Revue de Medecine Veterinaire. 150, 691-702

Величко С.В., Василик Н.С., Мисюрин А.В., Абраменко И.В.



Интересное в сети
 
 
поиск по сайту
 
© 2000-2017 by Oksana&Alexandr Lubenets
программирование - студия дизайна ICOM
 

  Яндекс.Метрика